Post by warrioes on Jul 30, 2023 6:16:57 GMT -5
止状态下是单体并且在光照射22、30时通称接触而二聚化。VVD 的这一特性已被用来设计光控转录激活剂或阻遏物23 , 24 , 25 , 26 , 27和蛋白质二聚剂31 , 32由我们和其他人。然而，尚不清楚光激活VVD蛋白的二聚化和稳定性之间是否存在任何相关性，特别是，据报道SULI中的一些突变可促进光诱导的VVD二聚体的稳定性29。因此，我们在 VVD 结构域的 Tyr40 处引入了突变，通过
破坏二聚体界面处的氢键来完全废除二聚化33，并使用 mCherry 作为亚洲手机号码列表报告基因分析了蓝光照射或黑暗条件下细胞中突变体的蛋白质水平。有趣的是，所有变体都表现出显着的光诱导报告蛋白稳定性（图 1c，补充图 5c ）），表明稳定化和二聚化的效果是不耦合的。在这些变体中，具有Y40E突变的变体显示出最大的稳定性开关比（图 1c，d）。进一步的尺寸排阻
色谱数据显示，具有Y40E突变的变体在黑暗状态或光激活状态下都是单体（补充图8 ）。因此，我们将这种变体称为 SULI（光诱导稳定）。使用 sfGFP 和 NanoLuc (NLuc) 荧光素酶作为报告基因，也观察到了 SULI 类似的光诱导稳定作用（图 1e、f）），证明了 SULI 对不同靶蛋白的良好适应性。综上所述，结果表明我们获得了一种高性能的光敏降解决定子，它在光照下稳定，但在黑暗条件下快速降